„Nowy program diagnostyki i leczenia zapalenia płuc wywołanego wirusem wieńcowym (wydanie dziewiąte próbne)” wykorzystuje wartość Ct wykrywania kwasów nukleinowych ≥35 jako jedną z ważnych podstaw do zwolnienia postępowania z izolacją lub wypisem ze szpitala.Co zatem reprezentuje wartość Ct zestawu do wykrywania kwasów nukleinowych?Czy wartości Ct różnych zestawów są porównywalne?Czy im niższa wartość Ct, tym lepsze działanie zestawu?
Wartość Ct (Threshold Cycle, Ct) to liczba cykli PCR, w których intensywność ilościowego sygnału fluorescencji fluorescencji w czasie rzeczywistym przekracza ustawiony próg.Przykładem nowej korony są zestawy do wykrywania kwasów nukleinowych.W przypadku tej samej reakcji tego samego zestawu w celu wykrycia dwóch próbek zawierających wirusa, A i B, wielkość wartości Ct reprezentuje, do pewnego stopnia, liczbę kopii genu wirusa, to znaczy miano wirusa.Im niższa wartość Ct próbki B, tym wyższe miano wirusa.Wartość Ct jest odwrotnie proporcjonalna do miana wirusa i jego zakaźności.Za i przeciw różnych zestawów ilościowych do fluorescencji w czasie rzeczywistym nie można oceniać wyłącznie na podstawie wielkości wartości Ct, ponieważ wartości Ct różnych zestawów nie są porównywalne.Ocena działania zestawu musi być mierzona pod kątem czułości (minimalny limit wykrywalności), specyficzności, precyzji, stabilności i zastosowania diagnostycznego.Każdy producent odczynników ma swoje osiemnaście rodzajów sztuk walki i mają one swoje własne magiczne moce w zastosowaniu, więc nie będę tu wdawał się w szczegóły.
W przypadku konwencjonalnych przyrządów/systemów do analizy ilościowej PCR w czasie rzeczywistym (QPCR) pozyskiwanie wartości Ct i ich szerokie zastosowanie w aplikacjach do wykrywania patogenów są znane wszystkim.Wraz z rozwojem branży i postępem technologii sprzęt i odczynniki QPCR napotkały możliwości i wyzwania.Yiou Think Tank (2021 Raport z badań na temat chińskiego przemysłu testów genetycznych: technologia) przeanalizował, że większość firm z branży QPCR w moim kraju boryka się z powszechnymi problemami opartymi na technologii.W odpowiedzi na te problemy rozwiązania dzielą się głównie na dwa typy: przyspieszenie doskonalenia technologii i wdrażanie nowych technologii.
POCT do diagnostyki molekularnej QPCR jest jednym z kierunków rozwoju branży, a poprawa wydajności jest ważnym czynnikiem przyspieszającym zastosowanie technologii.W przypadku sprzętu POCT z przepustowością pojedynczej próbki QPCR, jak zoptymalizować wartość Ct kluczowego parametru pojedynczej reakcji w R&D?Ten sam sprzęt, ten sam układ reakcji i to samo stężenie matrycy, teoretycznie im większa wartość Ct pojedynczej reakcji, tym mniejsza wydajność enzymu w reakcji.
W procesie poprawy wydajności reakcji enzymatycznej i optymalizacji wartości Ct, można najpierw przeanalizować typową krzywą amplifikacji ilościowej fluorescencji 40 cykli PCR.Krzywa amplifikacji na poniższym rysunku jest podzielona na fazę tła fluorescencji, fazę amplifikacji wykładniczej, fazę liniową i fazę plateau.W celu uzyskania niższego tła fluorescencji, tak dalece, jak to możliwe, aby odróżnić je od wartości fluorescencji wczesnej amplifikacji wykładniczej, konieczne jest testowanie z użyciem nośnika materiałów reakcyjnych, skriningu projektu sondy startera i układu buforów reakcyjnych.Wykładniczy okres amplifikacji jest najbardziej bezpośrednią reakcją aktywności enzymu, a także dowodem doskonałej koordynacji sprzętu POCT, nośników reakcji i odczynników.W tym czasie kontrola temperatury sprzętu, akwizycja i analiza sygnału optycznego, biokompatybilność nośnika i wydajność systemu odczynników muszą być dostosowane i przetestowane we wszystkich aspektach.Na koniec cała amplifikacja jest zakończona, a wyniki muszą być przedstawione przez rygorystyczny algorytm danych, aby uzyskać rozsądną wartość Ct.
Mały krok w optymalizacji wartości Ct to niezliczone kroki personelu R&D.W niepokoju i podnieceniu dnia i nocy, za każdym razem „nie widać nigdzie gór i rzek, wierzby są ciemne, kwiaty jasne i jest inna wioska”, co daje nam odwagę i pasję do pójścia naprzód ponownie.
Czas publikacji: 29 września-2022